M040原理
微生物法測定食品中的菸酸或菸酸胺需要三種培養基,
菸酸測定用培養基、接種培養基(相當於國標中的乳酸桿菌肉湯培養基)以及菌種維持培養基(相當於國標中的乳酸桿菌瓊脂培養基)。
菸酸測定用培養基是根據Snell和Wright(1)描述的配方,
並經Krehl, Strong、Elvehjam(2)和Barton Wright(3)進行了改良。
該培養基經美國分析化學家協會(AOAC)(4)和美國藥典(5)所推薦。
菸酸測定用培養基採用植物乳桿菌(ATCC 8014)為測定用菌,
標準曲線採用美國藥典推薦的濃度梯度(5),即0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 、0.25 μg/10ml/管。
菸酸測定用培養基可用於濁度和酸度分析。濁度分析時在35-37°C 培養16-18小時後進行。酸度分析是在35-37°C培養72小時後進行。
菸酸測定用培養基不含菸酸,
但包含所有植物乳桿菌(ATCC 8014)培養所需的必要營養和維生素。
添加特定濃度的菸酸會對應測定菌相應的生長,能用濁度法和酸度滴定法測量。
植物乳桿菌的貯存液是在“乳桿菌瓊脂,AOAC”(貨號M366)中製備。
方法是接種後35-37°C孵育24-48小時。
貯存菌液可接種乳桿菌肉湯(貨號M367)以製備接種菌液。
在35-37°C 孵育18-24小時後,離心,並用0.85% 生理鹽水清洗兩次,並調整其濃度。
將測定菌液加入到含有菸酸測定用培養基和菸酸系列濃度的試管中。
通過標準品製作標準曲線,並通過吸光度確定未知樣品的菸酸水平。
關於具體步驟,請參考國標或國外標準方法(4, 5)。
應非常小心避免培養基和玻璃器具的污染。
應使用潔淨的無去污劑的玻璃器具。
少量的外源物質的污染可能導致錯誤的結果。